نوع مقاله : مقاله پژوهشی

نویسندگان

• مریم صلواتی فر ¹
• شیدا کاشان پور ²
• علی هاتف سلمانیان ³

¹ عضو هیات علمی ایران، تهران، پژوهشگاه هوافضا، وزارت علوم، تحقیقات و فناوری

² دانشجوی کارشناسی ارشد

³ عضو هیات علمی پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری

چکیده

باکتری بیماریزای E. coli O157:H7 قادر به ایجاد طیف وسیعی از عوارض همانند اسهال خونی و سندرم اورمی همولیتیک میباشد. به دلیل مشکلات موجود در درمان آنتی بیوتیکی، به نظر میرسد ایمن سازی، مناسبترین روش مبارزه با این باکتری باشد. پروتئینهای (Intimin)، Tir و EspA، سه پروتئین اصلی در اتصال باکتری مذکور به اپیتلیال دستگاه گوارش میباشند. از طریق ممانعت از اتصال پروتئینهای مذکور در مراحل ابتدائی بیماری مهار خواهد شد. محققان با انتخاب بخشهای مؤثر پروتئینهای مذکور و تولید یک پروتئین نوترکیب کایمر، ایمونوژن کارآمدی جهت پیشگیری از بروز این بیماری ارائه نموده اند. از این رو دستیابی به مقادیر بالای پروتئین نوترکیب در کنار حفظ کیفیت و کارایی آن، بسیار مهم میباشد. با توجه به افزایش بیان کمّی و کیفی برخی پروتئینهای نوترکیب در شرایط حذف نیروی جاذبه، در مطالعه پیش رو بیان پروتئین نوترکیب EIT در شرایط شبیه ساز بیوزنی بر روی دستگاه کلینواستت مورد بررسی قرار گرفت. پس از بهینه سازی شرایط بیان و تائید پروتئین نوترکیب با روشهای ایمنولوژیک، در شرایط بی وزنی بیان آن القاء گردید و پس از تخلیص پروتئین توسط ستون کروماتوگرافی، مقدار آن مورد سنجش قرار گرفت. یافتهها حاکی از آن بودند که علی رغم کاهش میزان بیان در شرایط بی وزنی که احتمالاً به دلیل عدم هوادهی مناسب محیط کشت بوده است، هم چنان پروتئین نوترکیب با کیفیتی مناسب در شرایط بی وزنی تولید گردید. انتظار میرود با بهینه سازی شرایط و استفاده از روشهای هوادهی در بی وزنی، تولید پروتئینهای نوترکیب به طور قابل توجهی افزایش یابد.

کلیدواژه‌ها

• باکتری E. coli O157:H7
• سندرم اورمی همولیتیک
• پروتئین نوترکیب EIT
• شبیه ساز بی وزنی
• کلینواستت

موضوعات

• بیوتکنولوژی

عنوان مقاله [English]

Expression of recombinant EIT protein under simulated microgravity conditions

نویسندگان [English]

• maryam salavatifar ¹
• sheida Kashanpoor ²
• Ali Hatef Salmanian ³

¹ Department of Space Biology, Aerospace Research Institute, Ministry of Science Research and Technology, Tehran, Iran

² student

³ Faculty member/ NIGEB

چکیده [English]

The pathogenic E. coli O157: H7 is capable of causing a wide range of complications, such as dysentery and hemolytic uremic syndrome. Due to the difficulties in antibiotic treatment, immunization seems to be the most appropriate way to fight this bacterium. Intimin, Tir, and EspA proteins are the three major proteins involved in the binding of the bacterium to the gastrointestinal tract. By inhibiting the binding of these proteins, colonization is limited and disease is inhibited. Selecting the effective portions of these proteins and producing a recombinant chimeric protein by binding them together, researchers have developed a suitable and effective immunogen to prevent the disease. Therefore, achieving high amounts of recombinant protein, along with maintaining its quality and efficiency, is very important. In the present study, due to the increase in the quantitative and qualitative expression of some recombinant proteins under gravity removal conditions, the expression of EIT recombinant proteins under simulated microgravity conditions on a clinostat device was investigated. After optimizing the expression conditions and confirming the recombinant protein using immunological methods, its expression was induced in weightlessness simulator conditions. After purification of the protein by chromatographic column, its amount was measured by standard methods. The results showed that despite the decrease in expression under weightlessness, probably due to lack of proper aeration of the culture medium, recombinant protein was produced with appropriate quality under weightlessness. It is expected that with optimizing the conditions and using aeration methods in weightlessness, the production of recombinant proteins to significantly increases.

کلیدواژه‌ها [English]

• E. coli O157: H7 bacteria
• Hemolytic uremic syndrome
• EIT recombinant protein Simulated microgravity
• Clinostat