نوع مقاله : مقاله پژوهشی

نویسندگان

• اسکندر حسین نژاد لزرجانی ¹
• عباس دوستی ²
• علی شریف زاده ³

¹ گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاداسلامی، شهرکرد، ایران.

² مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران.

³ گروه میکروبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران

چکیده

در این مطالعه تجربی، ژن کد کننده ی پروتئین چاپرون بیوژنز فیمبریال Csu از باکتری اسینتوباکتر بومانی مقاوم به کارباپنم به روش PCR تکثیر شد. ژن مذکور به ترتیب در ناقل های T و pcDNA3.1 کلرن سازی و ساب کلون گردید. تایید صحت کلونینگ ژن با سه روش PCR، آنزیم های برش دهنده و تعیین توالی مورد ارزیابی قرار گرفت. سپس، مقدار 100 میکرولیتر از غلظت 100ng/ml از ناقل نوترکیب نهاییpcDNA3.1-csuC به عضله 4 سر ران موش BALB/c تزریق گردید و بیان ژن هدف در عضله 4 سر ران موش با روش RT-PCR بررسی شد و نتایج اختلاف بیان در سطوح معناداری P<0.05، P<0.01 و P<0.001 گزارش شد.

مشاهده باند 831 جفت بازی پس از انجام RT-PCR، در عضله 4 سر ران موش در گروهpcDNA3.1-csuC نسبت به گروه شاهد (PBS)، موید بیان ژن csuC در عضله 4 سر ران موش می باشد. در گروه هدف میزان بیان ژن هدف پس از 2 روز افزایش بیان قابل توجهی را نشان داد. این افزایش بیان تا روز 30 پس از تزریق به بالاترین سطح خود رسید و اختلاف بیان در سطح P<0.001 معنادار بود. افزایش بیان ژن 40 روز پس از تزریق به سطح معناداری P<0.01 کاهش یافت. این کاهش میزان بیان تا روز 60 پس از تزریق ادامه داشت (P<0.001).

سازواره نوترکیبpcDNA3.1-csuC ساخته شده در این تحقیق توان بیان ژن csuC اسینتوباکتر بومانی را در عضله 4 سر ران موش دارد. همچنین، سازوارهpcDNA3.1-csuC از پتانسیل لازم برای بررسی به عنوان واکسن ژنی در تحقیقات آینده برخوردار است.

کلیدواژه‌ها

• اسینتوباکتر بومانی
• csuC
• سازواره نوترکیبpcDNA3.1-csuC
• RT-PCR

موضوعات

• بیوتکنولوژی

عنوان مقاله [English]

Cloning and expression of the gene encoding fimbriae biogenesis Chaperone protein Csu from carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii in order to create a recombinant gene vaccine

نویسندگان [English]

• Eskandar Hosseinnezhad Lazarjani ¹
• Abbas Doosti ²
• Ali Sharifzadeh ³

¹ Department of Biology, Faculty of Basic Sciences, Islamic Azad University, Shahrekord Branch, Shahrekord, Iran

² Biotechnology Research Center, Shahrekord Branch, Islamic Azad University, Shahrekord, Iran

³ Department of Microbiology, Faculty of Veterinary Medicine, Shahrekord Branch, Islamic Azad University, Shahrekord, Iran

چکیده [English]

In this experimental study, the gene encoding the protein Chapron biogenesis fimbriae Csu was amplified by carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii by PCR. the gene was cloned and subcloned into T and pcDNA3.1 (+) vectors, respectively. Confirmation of gene cloning was evaluated by three methods: PCR, cleavage enzymes, and sequencing. Then, 100 μl of 100 ng/ml concentration of the final recombinant vector pcDNA3.1 (+) - csuC was injected into the quadriceps muscle of BALB / c mice and the expression of the target gene in the quadriceps muscle of mice was examined by RT-PCR and the results of expression differences at significant levels P <0.05, P <0.01, and P <0.001 reported. Observation of 831 bp band after RT-PCR in quadriceps muscle of mice in pcDNA3.1 (+) - csuC group compared to control group (PBS) confirms the expression of csuC gene in quadriceps muscle of mice. The results of the study of changes in gene expression in the target group compared to the control group showed that in the target group the expression of the target gene after 2 days showed a significant increase in expression. This increase in expression reached its highest level by day 30 after injection and the difference in expression was significant.

The recombinant pcDNA3.1 (+) - csuC construct made in this study can express the csuC gene of Acinetobacter baumannii in the quadriceps muscle of mice. Also, the pcDNA3.1 (+) - csuC construct has the potential to be considered as a gene vaccine in future research.

کلیدواژه‌ها [English]

• Acinetobacter baumannii
• csuC
• recombinant pcDNA3.1 (+) - csuC
• RT-PCR