نوع مقاله : مقاله پژوهشی
نویسندگان
1 گروه زیست شناسی سلولی و مولکولی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه مراغه، مراغه، ایران مرکز تحقیقات ایمونولوژی، دانشگاه علوم پزشکی تبریز،
2 هیئت علمی دانشگاه دولتی مراغه
3 مرکز تحقیقات ایمونولوژی، دانشگاه علوم پزشکی تبریز، تبریز، ایران
چکیده
پیشینه: لوسمی لنفوبلاستیک حاد T-cell (T-ALL) یک بدخیمی لنفوئیدی است که به علت دگرگونی اونکوژنیک اجدادT-cell ایجاد می شود. بسیاری از تغییرات ژنتیکی و اپی ژنتیکی به عنوان فاکتور های اصلی این دگرگونی بیان شده اند. اخیرا گزارش شده است که microRNA ها در لوسمی های مختلف از جمله T-ALL نقش دارند. بیان نابجای این microRNA ها در تکثیر، تهاجم و آپوپتوز از طریق هدف قرار دادن مسیر های سیگنالی گزارش شده است. miR-34a یک سرکوب کننده تومور در بسیاری از سرطان ها از جمله T-ALL است.
مواد و روش ها: در این مطالعه تجربی، سلول های لوسمی لنفوبلاستیک حاد T-cell (T-ALL) ، Jurkat در محیط کشت کامل RPMI 1640 کشت شدند و miR-34a mimic با استفاده از معرف ترانسفکشن vitro DNA in jetPEI ، ترانسفکت شد. پس از گذشت 24 ساعت، استخراج RNA و سنتز cDNA انجام شد. میزان بیان miR-34a و ژن های BACH1، PTEN وSIRT1 با استفاده از روش Real-Time PCR بررسی شد.
یافته ها: تجزیه و تحلیل نتایج حاصل از qPCR نشان داد که در سلول های Jurkat پس از ترانسفکشن با miR-34a بیان ژن های BACH1، وSIRT1 کاهش و بیان ژن PTEN افزایش می یابد.
بحث و نتیجه گیری: کاهش بیان miR-34a با متاستاز و تهاجم تومور در سرطان های مختلف نقش دارد. در مطالعه حاضر، نتایج ما نشان داد که بیان ژن های BACH1، وSIRT1 که جزو ژن های انکوژن هستند پس از ترانسفکت miR-34a کاهش می یابد و بیان ژن PTEN که تومور ساپرسور می باشد پس از ترانسفکت miR-34a افزایش می یابد.
کلیدواژهها
موضوعات
عنوان مقاله [English]
The role of microRNA-34a in BACH1، PTEN and SIRT1 expression in T-cell acute lymphoblastic leukemia cell line (Jurkat)
نویسندگان [English]
1 Department of Cell and Molecular Biology, Faculty of Science, University of Maragheh, Maragheh, Iran Immunology Research Center, Tabriz University of Medical Sciences, Tabriz, Iran
2 University of Maragheh
3 2 Immunology Research Center, Tabriz University of Medical Sciences, Tabriz, Iran
چکیده [English]
Background: T-cell acute lymphoblastic leukemia is a lymphoid malignancy affected by oncogenic transformation of immature T-cell progenitors. Recently, it has been reported that microRNAs play a role in various leukemias including T-ALL. The aberrant expression of these microRNAs in proliferation, invasion, and apoptosis has been reported through targeting signaling pathways. miR-34a is a tumor suppressor in many cancers, including T-ALL.
Materials and methods: In this experimental study, Jurkat T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL) cells were maintained in RPMI 1640. miR-34a mimic was transfected using jetPEI in vitro DNA transfection reagent. RNA extraction and cDNA synthesis were performed after 24 h. Expression of miR-34a and BACH1, PTEN and SIRT1 genes were examined using qRT-PCR.
Results: qRT-PCR analyses showed that in Jurkat cells after transfection with miR-34a mimic the expression of BACH1 and SIRT1 genes were reduced and the expression of PTEN was increased.
Conclusion: Low expression level of miR-34a in associated with metastasis and tumor invasion in different cancers. In current study, our results showed that the expression levels of BACH1 and SIRT1 genes which are oncogenes reduced and the expression levels of PTEN which is tumor suppressor increased after the transfection with miR-34a.
Keyword: -cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL), miR-34a, Jurkat cell line
کلیدواژهها [English]
نقش تنظیمی miR-34aدر پیشروی سلول های لوسمی لنفوبلاستیک حاد T-cell با هدف قرار دادن ژنهای BACH1، PTEN و SIRT1
شیوا نجاری1،2، رضا محمدزاده1* و بهزاد برادران2
1 ایران، مراغه، دانشگاه مراغه، دانشکده علوم پایه، گروه زیست شناسی سلولی و مولکولی
2 ایران، تبریز، دانشگاه علوم پزشکی تبریز، مرکز تحقیقات ایمونولوژی
تاریخ دریافت: 11/3/98 تاریخ پذیرش: 9/6/98
چکیده
لوسمی لنفوبلاستیک حاد T-cell (T-ALL) یک بدخیمی لنفوئیدی است که بعلت دگرگونی اونکوژنیک اجدادT-cell ایجاد میشود. اخیرا گزارش شده است که میکرو RNAها در لوسمیهای مختلف از جمله T-ALL نقش دارند. بیان نابجای این میکرو RNAها در تکثیر، تهاجم و آپوپتوز از طریق هدف قرار دادن مسیرهای سیگنالی گزارش شده است. MiR-34a یک سرکوب کنندهتومور در بسیاری از سرطانها از جمله T-ALL است. هدف از این مطالعه، بررسی نقش تنظیمی miR-34a در پیشروی سلولهای لوسمی لنفوبلاستیک حاد T-cell با هدف قرار دادن ژنهایBACH1 ، PTEN وSIRT1 میباشد. در این مطالعه سلولهای لوسمی لنفوبلاستیک حاد T-cell (T-ALL) در محیط کشت کامل RPMI 1640 کشت شدند و miR-34a mimic با استفاده از معرف ترانسفکشن vitro DNA in jetPEI، ترانسفکت شد. پس از گذشت 24 ساعت، استخراج RNA و سنتز cDNA انجام شد. میزان بیان miR-34a و ژنهای BACH1، PTEN وSIRT1 با استفاده از روش Real-Time PCR مورد بررسی قرار گرفت. نتایج توسط نرم افزار Graph Pad Prism 6 و آزمون Sidak وTurkey، تجزیه و تحلیل شدند. تجزیه و تحلیل نتایج حاصل از qPCR نشان داد که بیان ژنهای BACH1 وSIRT1 که جزء ژنهای انکوژن هستند پس از ترانسفکتmiR-34a کاهش مییابد و بیان ژن PTEN که سرکوبگر تومور میباشد پس از ترانسفکت miR-34a افزایش مییابد.
واژه های کلیدی: لوسمی لنفوبلاستیک حاد T-cell (T-ALL)، miR-34a، BACH1، PTEN و SIRT1
* نویسنده مسئول، تلفن: 04137272072، پست الکترونیکی:rmohamadzadeh@maragheh.ac.ir
مقدمه
لوسمی حدود 8 درصد از کل موارد سرطان را در جهان تشکیل میدهد و شامل همهی گروههای سنی با بروز متفاوت در ایران و جهان است (54). لوسمی لنفوبلاستیکحاد (ALL) یک بدخیمی خونی بسیار تهاجمی است که ناشی از تکثیر و گسترش بلاستهای لنفوئیدی در خون، مغز استخوان و سایراعضای بدن است (32). ALL رایج ترین بیماری لوسمی حاد دوران کودکی است که 80٪ از لوسمیهای کودکان را شامل میشود اما تنها 20٪ از لوسمیهای بالغین را تشکیل می دهد (5). ALL با توجه به سلولهای لنفوبلاستیکی که تحت تاثیر قرار میگیرند، میتواند به T-cell ALL (T-ALL) و B-cell ALL (B-ALL) تقسیم شود (41). T-ALL تقریبا 20٪ از همه موارد ALL را تشخیص میدهد و در بزرگسالان نسبت به کودکان شایعتر است (50). تظاهرات بالینی T-ALL شامل تب، ترومبوسیتوپنی، خونریزی، عفونت و توده های تیموسی بزرگ متعدد میباشد (9, 33). در حال حاضر درمان T-ALL شیمی درمانی با دوز بالا است که میزان بقای کودکان بیمار را افزایش داده است. با این حال شیمی درمانی دارای عوارض جانبی کوتاه مدت و بلند مدت است. همچنین عود بیماری چالش مهم دیگری است که در بیماران T-ALL مشاهده میشود (19,25). کشف میکرو RNAها درک جدیدی را از سرطان زایی بوجود آورده است. تنظیم نابجای میکرو RNAها میتواند منجر به اختلال در سیستم خونی و ایجاد سرطان خون شود (39). میکرو RNAها برای اولین بار در سال 1993 توسط لی و همکارانش در نماتد سینورابدیتیس الگانس (Caenorhabditis elegans) شناسایی شدند (30). miRNAها نقش مهمی در تنظیم مسیرهای متابولیک و سلولی متعدد مانند کنترل تکثیر سلولی، تمایز و بقا دارند. اعضای خانواده miR-34 شامل سه میکرو RNA پردازش شده است که شامل miR-34a و همولوگ های miR-34b و miR-34c است (3,14) و حذف در این مناطق اغلب در انواع سرطانهایی از جمله سرطان پستان، سرطان ریه، سرطان کولورکتال و بدخیمی های خونی دیده میشود (4). miR-34a از میکرو RNAهای سرکوبگر توموراست که کاهش بیان دارد و در این مورد درمان با بازگرداندن بیان این میکرو RNA بحالت نرمال انجام میگیرد که برای این منظور از روش درمان با جایگزینی میکرو RNA استفاده میشود (6,47). افزایش بیان miR-34 با رشد سلولهای کلونوژنیک، تهاجم سلولی، متوقف شدن آپوپتوز و کاهش حساسیت سلولها به شیمی درمانی در سرطان پانکراس مرتبط است. در مطالعه دیگری نشان داده شد که خانواده miR-34 می تواند بیان و جهش p53 را تنظیم کند، در حالی که miR-34b و miR-34c، MYC را هدف قرار می دهد (11,16, 27, 43). علاوه بر این، miR-34a میتواند بیان ژن SIRT1 را مهار کند و بیان p53 استیله و p21 را افزایش دهد و موجب تنظیم چرخه سلولی و آپوپتوز شود (52). BACH1 یک ژن کد کننده پروتئین است. از مسیرهای مرتبط با آن میتوان به مسیر سرطان پستان یکپارچه و مسیر BRCA1 اشاره کرد. تفسیر هستی شناسی ژن مربوط به BACH1 شامل فعالیت فاکتور رونویسی اتصال دهنده DNAو اتصال پروتئین هِم است (18). پروتئین PTEN یک مهارکننده تومور است که فعالیت آن اغلب در سرطان های انسانی کاهش مییابد. بنابراین فعال شدن مجدد چنین پروتئینی بطور بالقوه میتواند یک درمان مؤثرعلیه سرطان باشد (53). سیتروئینها بدلیل نقشهای متنوعی که در وقایع مختلف فیزیولوژیکی و پاتولوژیکی از جمله اختلالات مرتبط با سن، چاقی، التهاب و سرطان دارند، توجه ویژهای به خود جلب کردهاند. نقش SIRT1 در سرطانها در سالهای اخیر بسیار مورد مطالعه قرار گرفته است. با این حال نقش سیتروئینها در سرطانها هنوز هم مورد بحث است زیرا میتوانند با توجه به بافت سلولی یا اهداف آن در مسیرهای خاص سیگنالی یا سرطانهای خاص بعنوان سرکوبگر تومور یا انکوژن عمل کنند (31). شناسایی میکرو RNAها و اهداف آنها که در توسعه سرطان و متاستاز نقش دارند، ممکن است فرصتهای درمانی جدیدی فراهم کند (20, 28, 34, 35, 49). هدف از پژوهش حاضر بررسی تاثیرترانسفکت miR-34a و افزایش بیان آن بر میزان بیان ژنهای هدف BACH1، PTEN و SIRT1 در رده سلولی Jurkat در لوسمی لنفوبلاستیک حادT-cell (T-ALL) میباشد.
مواد و روشها
کشت سلولهای JURKAT: رده سلولیJurkat از انستیتوپاستور ایران به صورت ویال خریداری شد. سلول ها در محیط کشت RPMI-1640 غنی شده با 10% FBS (USA-GibcoBRL) و 1% آنتی بیوتیک پنی سیلین/ استرپتومایسین (USA-GibcoBRL) در 37 درجه سانتی گراد و اتمسفر مرطوب حاوی 5% CO2 کشت داده شدند.
ترانسفکت miR-34a: برای ترانسفکتmiR-34a ، سلولهای Jurkat در پلیت 6 خانهای به مقدار تقریبی105× 8 سلول در هر چاهک کشت شدند. برای انجام بقیه مراحل انتقال از پروتکل شرکتjetPEI (PolyPlus-transfection, Strasbourg, France) استفاده شد. برای این منظور ابتدا در میکروتیوپ 200 μl، بافر و غلظت های 1 و 5 و 10 نانومول از miR-34a و4μl jetPEI اضافه شد و بمدت 15 دقیقه در دمای محیط انکوبه گردید. پس از گذشت این مدت زمان، مخلوط موجود به چاهکهای پلیت منتقل شد و سپس پلیت حاوی سلولهای ترانسفکت شده بمدت 24 ساعت در انکوباتور 37 درجه سانتی گراد با 5% CO2 انکوبه گردید. زمان و غلظت موثر miR-34a بر روی سلولهایJurkat بررسی شد و در نهایت ازغلظت متوسط (5 نانومول) استفاده شد. دراین آزمایش از U6 بعنوان کنترل داخلی استفاده شد و بیان ژن های مرتبط با کنترل که 1 در نظر گرفته شده بود، محاسبه گردید.
استخراج RNA و سنتز cDNA : کارایی ترانسفکشن miR-34a پس از 24 ساعت بررسی شد و بمنظور تغییر بیان ژنها توسط میکروRNA ، RNA کل سلول با استفاده از محلول Riboex (GENEALL Biotechnology, Seoul, Korea) استخراج شد. سپس میزان خلوص RNA استخراج شده توسط دستگاه Nano drop اندازه گیری شد. DNA مکمل (cDNA) با استفاده از کیت سنتز miScript II RT (QIAGEN, Hilden, Germany) برای miR-34a با توجه به پروتکل شرکت سازنده سنتز شد. سنتز cDNA ژنهای BACH1، PTEN و SIRT1 با استفاده از کیت (BIOFACT, korea) انجام شد. سنتز رشته cDNA از روی رشته RNA به کمک پرایمر Random hexamer صورت گرفت.
qRT-PCR: تغییرات میزان بیان میکروRNA با روش qRT-PCR با استفاده از کیت miScript SYBR Green PCR (QIAGEN, Hilden, Germany) که حاوی پرایمرهای اختصاصی این میکرو RNA است، بررسی شد. ژن U6 بعنوان کنترل داخلی miR-34a و ژن β‐Actin بعنوان کنترل داخلی ژنهای BACH1، PTEN وSIRT1 استفاده شد. طراحی پرایمرها با استفاده از سایت مخصوص طراحی پرایمر، primer blast در NCBI صورت گرفت و توسط شرکت تکاپو زیست، پرایمرها سنتز شدند. توالی هدف پرایمر miR-34a در جدول1 و توالی پرایمر ژن های BACH1، PTEN وSIRT1 در جدول2 نشان داده شده است. داده ها با استفاده از روش Pfaffle (2-∆∆Ct) آنالیزشد.
جدول 1- توالی هدف پرایمر miR-34a
UGGCAGUGUCUUAGCUGGUUGU |
miR-34a |
Forward : CTTCGGCAGCACATATACTAAAATTGG |
U6 |
Reverse : TCATCCTTGCGCAGGGG |
جدول 2- توالی پرایمر ژن های BACH1، PTEN و SIRT1
Forward : TCCCTGGAGAAGAGCTACG |
β‐Actin |
Reverse : GTAGTTTCGTGGATGCCACA |
|
Forward :TGCGATGTCACCATCTTTGT |
BACH1 |
Reverse : CCTGGCCTACGATTCTTGAG |
|
Forward : TGGCAAAGGAGCAGATTAGTAGG |
SIRT1 |
Reverse : CTGCCACAAGAACTAGAGGATAAGA |
|
Forward : GGTTTTTTGAGGTGTTT |
PTEN |
Reverse : AAAAACTAAACACAATCACA |
آنالیز آماری: جهت تجزیه و تحلیل آماری نتایج بدست آمده از نرم افزار Graph Pad Prism 6 استفاده شد. برای تعیین تغییرات متغیر بین گروههای کنترل و ترانسفکت شده با میکرو RNA از آزمون Sidak و Turkey استفاده گردید که سطح معنی داری p< 0.05 در نظر گرفته شد.
نتایج
تغییر بیان miR-34a پس از ترانسفکشن سلول Jurkat: بیان miR-34a در گروه کنترل و گروه سلولهای ترانسفکت شده با miR-34a توسط آزمایش qRT-PCR ارزیابی شد. نتایج نشان داد که بعد از ترانسفکت miR-34a میزان بیان این میکروRNA بمیزان قابل توجهی پس از 72 ساعت افزایش یافته است و بـا اسـتفاده از روش 2-∆∆Ctافزایش 300 برابری بوده است (شکل 1). دراین مطالعه 05/0 > p (غلظت) و 00001/0 > p (زمان) معنیدار در نظر گرفته شد. این نتایج تجزیه و تحلیل بیان نشان داد که miR-34a ممکن است یک هدف مهم درمانی باشد.
شکل1- تغییرات بیان miR-34a در سلول های ترانسفکت شده با miR-34a و گروه کنترل در زمان های 24، 48 و 72 ساعت و غلظت های 1، 5 و 10 نانومول توسط qRT-PCR ارزیابی شد، (A) بیان miR-34a درغلظت های مختلف و P <0.05)) معنی دار است، (B) بیان miR-34a در زمان های مختلف و (P <0.00001) معنیدار است.
ارتباط بیان miR-34a و بیان ژنهای BACH1، PTEN و SIRT1: نتایج نشان داد که میزان بیان ژنهای BACH1 وSIRT1 در اثر ترانسفکشن با miR-34a نسبت به گروه کنترل کاهش مییابد که این کاهش معنی دار است (001/0 > p) و بیان ژن PTEN در اثر ترانسفکشن با miR-34a نسبت به گروه کنترل افزایش مییابد که این افزایش معنیدار است (001/0 > p). سطح بیان نسبی ژن BACH1 در گروه ترانسفکت شده با میکرو RNA، 7 درصد بود که نسبت به نمونه کنترل کاهش یافته بود (شکل2). سطح بیان نسبی ژن SIRT1 در گروه ترانسفکت شده با میکرو RNA، 8 درصد بود که نسبت به نمونه کنترل کاهش یافته بود (شکل3). سطح بیان نسبی ژن PTEN در گروه ترانسفکت شده با میکرو RNA ، 17 درصد بود که نسبت به نمونه کنترل افزایش یافته بود (شکل4).
بحث
لوسمی لنفوبلاستیک حاد (ALL) شایع ترین بدخیمی در
کودکان است. T-ALL، سلولهای بنیادی تولید کننده سلولهای لنفوئیدی، بخصوص نوعی از سلولهای سفید خون به نام لنفوسیتهای T را تحت تاثیر قرار میدهد (10,51).
شکل2- تغییرات بیان ژنBACH1 در سلولهای ترانسفکت شده با غلظت 5 نانومول از miR-34a و گروه کنترل در سلول Jurkat توسط qRT-PCR ارزیابی شد.
شکل3- تغییرات بیان ژنSIRT1 در سلول های ترانسفکت شده با غلظت 5 نانومول از miR-34a و گروه کنترل در سلول Jurkat توسط qRT-PCR ارزیابی شد.
شکل4- تغییرات بیان ژنPTEN در سلول های ترانسفکت شده با غلظت 5 نانومول از miR-34a و گروه کنترل در سلول Jurkat توسط qRT-PCR ارزیابی شد.
میکرو RNAها کلاسی از RNAهای غیر کدکننده درونزا هستند که بعنوان تنظیم کنندههای اصلی ژنوم انسان عمل میکنند (1, 2, 8). بیان نابجا و عملکرد میکرو RNAها در بسیاری از بیماری های انسانی این اجزای کوچک سلولی را به اهداف درمانی تبدیل کرده است (15,22). بویژه در سرطان، برخی از میکرو RNAها با معیارهای سختگیرانهای برای تبدیل شدن به اهداف ایدهآل درمانی با عملکرد به عنوان آنکوژنها و سرکوب کننده توموررو به رو میشوند (23, 29, 44, 45). میکروRNA ها تقریبا در تمام بدخیمی های جامد و خونی تنظیم نابجا دارند (36). miR-34a بعنوان یک میکروRNA سرکوبکننده تومور شناخته شده است. با توجه به شواهد علمی که در حال افزایش است، مشخص است که miR-34a از طریق تنظیم و تغییر تعدادی از آنکوژنها، رشد تومور را مهار میکند. مطالعات مختلفی در مورد نقش miR-34a در سرطانهای مختلف انجام شده است. در مطالعهای توسط Qing و همکارانش miR-34 mimic که به سلول سرطانی معده، Kato III ترانسفکت شده بود، باعث کاهش رشد سلول، مهار پیشرفت در طی چرخه سلول و افزایش آپوپتوز دراین سلولها شد (26). در مطالعه دیگری Mraz و همکارانش مشاهده کردند که بیان miR-34a به طور مداوم در CLL با جهش های p53 کاهش مییابد که نشان میدهد تشخیص بیان miR-34a میتواند بعنوان پیش بینی کننده برای پاسخ درمانی استفاده شود (40). BACH1 یک ژن کد کننده و یک عامل رونویسی است که در تعادل سلولی پاسخ استرس هِم اکسیداتیو، تنظیم پیشرفت چرخه سلولی و تنظیم HO-1 (هموژناز1) در سرطانها دخالت دارد. همچنین BACH1 بعنوان پروتئین متصل به گروه پروستتیک هِم نیز شناخته میشود. این پروتئین از طریق دومِین BTB-POZ هترودیمر تشکیل می دهد که به کمپلکس DNA-binding متصل میشود و در تنظیم ساختار کروموزومی دخالت دارد. ویژگی اتصال به هِم به طور منفی فعالیت DNA-binding را تنظیم میکند. اگرچه BACH1 به عنوان مهارکننده رونویسی گزارش شده است ولی میتواند به عنوان فعال کننده ژنهای هدف نیز عمل کند. بر اساس مطالعات دخالت BACH1 در سرطان ها بویژه سرطان پستان گزارش شده است. ژن BACH1 در تنظیم چندین ژن از جمله CXCR4 و MMP1 که در مهاجرت و متاستاز سلول های سرطانی به ارگانهای دیگر نقش دارند، دخالت دارد (18). در مطالعه دیگری ژن BACH1 در میان ژن های کروموزوم 21 شناسایی شده است که بیان بالای آن در لوسمی مگاکاریوبلاستیک مزمن (AMKL) نشان داده شده است (12). فسفاتاز PTEN دارای موتیف فعال اختصاصی برای خانواده پروتئین تریروزین فسفاتازاست و فسفاتیدیل اینوزیتول تری فسفات (PIP3) سوبسترای اصلی آن است (21). همچنین PTEN آنتاگونیست اصلی مسیر PI3 کیناز است که نشان دهنده نقش مهم آن در کنترل پیشرفت و توسعه تومور است. نتایج مطالعات بر روی PTEN درک بسیاری از جنبههای زیست شناسی مانند متابولیسم فسفولیپید و مسیرهای سیگنالی پایین دست، تنظیم فرآیندهای سلولی مانند مهاجرت و در نهایت اصول ژنتیکی مهار سرطان را فراهم آورده است. ارتباط مهارPTEN در سطح رونویسی با لوسمی T cell بیان شده است (53). همچنین بر اساس مطالعات ارتباط بین مقاومت به گاما-سکرتاز (GSI) در لوسمی تحت تاثیرNOTCH1 با جهش PTEN یافت شده است که نشان دهنده اهمیت مسیر PTEN در این بدخیمی هاست. علاوه بر این مطالعات مشابه در مورد نقش PTEN در درمانهای هدفمند در مورد ارتباط تغییرات PTEN/PI3K و مقاومت به مهارکننده های HER2، Herceptin/Trastuzumab در سرطان پستان (42) و مقاومت به مهار کنندههای EGFR، Erlotinib و Gefitinib در بیماران گلیوبلاستوما انجام شده است (38). SIRT1 یکی از اعضای خانواده Sirtuin است. SIRT1 یک نیکوتین آمید آدنوزین دی نوکلئوتید (NAD) وابسته به دِاستیلاز است و گروه استیل را از بسیاری از پروتئینهای هیستونی و غیر هیستونی جدا میکند (37,46). بر اساس گزارشات بیان شده است که سطح SIRT1 بطور چشمگیری در سرطان پروستات (24)، لوسمی میلوئیدی حاد (13) و سرطان کولون در مرحله اولیه (48) بالا است.
نتیجه گیری
در این مطالعه تاثیر miR-34a بر میزان بیان ژنهای BACH1، PTEN وSIRT1 در رده سلولیJurkat مورد مطالعه قرار گرفت. نتایج نشان داد که میزان بیان PTEN که یک سرکوبگر تومور است در اثر انتقال با miR-34a افزایش و میزان بیان ژن های BACH1 و SIRT1 که انکوژن هستند، کاهش مییابد. در مطالعه ای که توسط Yamakuchi و همکارانش نیز انجام شد، نشان دادند miR-34a بیان ژن SIRT1 را مهار میکند که منجر به افزایش بیان ژن های P53 و P21 میشود که در نهایت موجب القای آپوپتوز در سلول های سرطان کولون WT میشود (52). نتایج ما میتواند بیان کننده این باشد که با القای افزایش بیان این میکرو RNA و تاثیر آن بر افزایش بیان PTEN و کاهش بیان ژن های BACH1 وSIRT1 میتوان تکثیر سلولها در این بیماری را کاهش داد. علاوه براین، ژن PTEN میتواند بعنوان مارکر تشخیصی، پیش آگهی و همچنین هدف درمانی سرطان، مورد بررسیهای بیشتر قرار گیرد. بـا توجـه بـه محـدودیتهـای مطالعه حاضرازقبیل بررسی در سطح آزمایشگاهی و مطالعه بر روی یک رده سلولی، پیشنهاد میشود که میزان بیـان miR-34a در دیگر رده های سلولی و در سطح کلینیکی نیز مورد بررسی قرار گیرد.