@article { author = {Azizi, Hosein and shahverdi, abdolhossein and Hosseinzadeh Colagar, Abasalt}, title = {Investigation of Spermatogonial Stem Cells in Adherent and Non-Adherent Culture}, journal = {Cellular and Molecular Research (Iranian Journal of Biology)}, volume = {31}, number = {3}, pages = {337-347}, year = {2018}, publisher = {Iraninan Biology Society}, issn = {2383-2738}, eissn = {2383-2746}, doi = {}, abstract = {Spermatogonial stem cells are the undifferentiated cells in the basal membrane of the seminiferous tubules and are able to produce sperm in male testis. Different experimental studies proved the capatility of undifferentiated spermatogonial stem cells to culture under different conditions, after isolation of the testes. In this study mouse neonate testicular cells (5-7 days-old NMRI strain) isolated by digestive enzymes include Collagenase IV, Dispase and DNAse. Then, approximately 106 cells were cultured in both adherent on MEF feeder layer and non-adherent culture system on 1% agarose with condition mediums that contained growth factors. Studies demonstrates that testicular cells cultured in a non-adherent condition (non-adherent colonies) were able to form colonies similar to spermatogonial stem cell colonies in adherent condition (adherent colonies) and clearly expressed germ cell marker. Electron microscope analyses made evident that both types of colonies were similar to localized spermatogonial stem cells on the basement membrane of seminiferous tubules and showed a high nucleus/cytoplasm ratio. Immunocytochemistry assays proved that both of colony expressed germ cell markers β1-Integrin, α6-Integrin and Oct4 positive. Real-time PCR analysis revealed significant differences in the expression of germ cell genes Oct4, Sox-2, CD9 and EPCAM, between these colonies and somatic cells. On the other hand, high expression of Ki67 in these colonies showed that these cells have proliferative characteristics. These results proved that a non-adherent culture system similar to adherent culture could provide a favorable method for in vitro short-term culture of spermatogonial stem-like cell colonies.}, keywords = {Spermatogonial Stem Cells,Germ cell culture,Eexpression of germ cell markers,Ki67 expression}, title_fa = {بررسی کشت سلول‌های بنیادی اسپرم ساز در شرایط چسبنده و غیر چسبنده}, abstract_fa = {سلول‌های بنیادی اسپرم ساز سلول‌هایی هستند که در غشاء پایه لوله های اسپرم ساز قرار گرفته و قادر به تولید اسپرم در طول حیات مردان می-باشند. مطالعات مختلف آزمایشگاهی نشان داد این سلول‌ها بعد از جداسازی از بافت بیضه، تحت شرایط های خاص قادر به کشت هستند. در این مطالعه سلول‌های بیضه موش های نر5-7 روزه نژاد NMRIپس از تیمار با آنزیم‌های هضم کننده کلاژناز تیپIV، DNAse و دیسپاز، جداسازی شدند. سپس تعداد تقریبی106 سلول در محیط ‌های حاوی فاکتورهای رشد با شرایط کشت چسبنده، روی فیبروبلاست جنینی موش و کشت غیر چسبنده، روی آگارز 1 درصد، کشت داده شدند. نتایج نشان داد سلول‌های بیضوی کشت شده در شرایط غیرچسبنده قادر به تشکیل کلنی‌هایی بوده که همانند کلنی‌های سلول‌های بنیادی اسپرم ساز تشکیل شده در شرایط کشت چسبنده، مارکرهای سلول‌های جنسی را بیان می-کنند. مطالعه میکروسکوپ الکترونی کلنی‌ها نشان داد، هر دو نوع کلنی همانند سلول‌های اسپرم ساز واقع در غشاء پایه لوله‌های اسپرم ساز دارای هسته بزرگ اما سیتوپلاسم کوچک می‌باشند. رنگ‌آمیزی ایمونوفلورسانس وجود کلنی‌های β1-Integrin، α6-Integrin و Oct4 مثبت را تایید کرد. آنالیزهای Real-time PCR نیز تفاوت معنی‌داری در بیان ژن‌های سلول‌های جنسی این کلنی‌ها با سلول سوماتیکی نشان داد. از طرف دیگر افزایش بیان Ki67 در هر دو نوع کلنی با استفاده از بررسی ایمونوسیتوشیمی مشاهده شد که بیانگر خاصیت تکثیرپذیری این قبیل از سلول-ها است. این نتایج نشان می‌دهد سیستم کشت غیر چسبنده می‌تواند بعنوان یک روش جدید برای کشت کوتاه مدت سلول‌های جنسی مشتق شده از بیضه مورد توجه محققین در تحقیقات بعدی قرار گیرد.}, keywords_fa = {Spermatogonial Stem Cells,Germ cell culture,Eexpression of germ cell markers,Ki67 expression}, url = {https://cell.ijbio.ir/article_1283.html}, eprint = {https://cell.ijbio.ir/article_1283_228f7d89b2975498350436eb7aeeaa29.pdf} }